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SEM掃描電鏡樣品制備技術分享

日期:2025-01-13 10:53:28 瀏覽次數:152

掃描電鏡樣品制備技術是獲取高質量SEM掃描電鏡圖像和分析結果的關鍵步驟。以下是對掃描電鏡樣品制備技術的詳細分享:

一、SEM掃描電鏡樣品制備的基本要求

保持完好的組織和細胞形態:對于生物樣品,需要確保其結構和形態在制備過程中不受破壞。

充分暴露要觀察的部位:通過適當的處理,使需要觀察的部位清晰可見。

臺式掃描電鏡ZEM15.jpg

良好的導電性:掃描電鏡樣品需要具備良好的導電性,以避免電荷積累導致的圖像畸變。對于非導電樣品,需要進行導電處理,如噴鍍金屬膜。

較高的二次電子產額:適當提高樣品表面的二次電子發射率有助于提高成像質量。

保持充分干燥的狀態:殘留水分會加速電子槍陰極材料的揮發,并散射電子束導致分辨率下降。

二、SEM掃描電鏡樣品制備的常用方法

塊狀樣品制備方法

小塊樣品:可直接固定在碳導電膠帶上。

塊體較大或需要高分辨觀測的樣品:可采用碳/銀導電漿液進行固定,或在碳導電膠帶固定后再在其四周刷上碳膠或銀膠。為確保固定牢靠,可在其表面固定兩條膠帶連接到樣品臺上,以增強導電與固定的作用。

粉末樣品制備方法

常規粉體:可用牙簽挑起后彈在導電膠帶上,然后用洗耳球或壓縮空氣等吹掉浮粉。若感覺量少或需要做能譜分析,可重復多次上述步驟。

較大粉體、不導電粉體或磁性粉體:可將液態的碳膠或銀膠刷在樣品臺上,在未干之前利用牙簽挑起粉體彈在其上,然后用洗耳球或壓縮空氣等吹掉浮粉。

小顆粒粉體、易團聚粉體或需要進行顆粒度統計的粉體:需先利用稀釋溶液對粉體進行稀釋超聲分散后才可進行觀測。具體步驟包括稀釋、超聲分散、取樣、滴樣和烘干等。

生物樣品制備方法(以微生物為例)

取樣:根據樣品類型,用適當的方法取樣,如用無菌剪刀從陽極上剪下一塊電極生物膜樣品。

固定:用適當的固定劑(如戊二醛)對樣品進行固定,以保存其結構和形態。固定時間和條件需根據樣品類型進行調整。

沖洗:用適當的緩沖溶液(如磷酸緩沖溶液)對樣品進行沖洗,以去除固定劑殘留。

脫水:用乙醇等脫水劑對樣品進行脫水處理,以去除水分。脫水過程中需逐漸提高乙醇濃度,以避免樣品變形。

置換:用適當的置換劑(如乙酸異戊酯)置換脫水劑,為干燥做準備。

干燥:采用臨界點干燥法等方法對樣品進行干燥處理,以避免樣品在干燥過程中變形。

粘樣:用導電膠布等將樣品粘貼在掃描電鏡樣品臺上。

噴金:用離子濺射鍍膜儀等設備在樣品表面鍍上一層金屬膜(如金膜),以提高樣品的導電性和二次電子產額。

三、掃描電鏡樣品制備的注意事項

避免污染:樣品中不能存在揮發物、污染物等,否則將污染真空系統并影響成像質量。

防止損傷:在制備和觀察過程中,需避免對樣品造成不必要的損傷,如機械損傷、熱損傷等。

控制鍍膜厚度:鍍膜厚度對成像質量有重要影響。過厚會掩蓋樣品細微結構,過薄則無法起到導電作用。通常鍍層厚度控制在1~10納米較為合適。

選擇合適的制備方法:不同類型的樣品在形態和性質上存在巨大差異,需根據樣品類型選擇合適的制備方法。

綜上所述,SEM掃描電鏡樣品制備技術是一項復雜而精細的工作,需要根據樣品類型和需求選擇合適的制備方法,并嚴格控制制備過程中的各個環節,以確保獲得高質量的掃描電鏡圖像和分析結果。

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